(Flowcytometri, FCM) er en celleanalysator som måler fluorescensintensiteten til fargede cellemarkører. Det er en høyteknologisk teknologi utviklet basert på analyse og sortering av enkeltceller. Det kan raskt måle og klassifisere størrelsen, indre struktur, DNA, RNA, proteiner, antigener og andre fysiske eller kjemiske egenskaper til celler, og kan være basert på samlingen av disse klassifiseringene.
Flowcytometer består hovedsakelig av følgende fem deler:
1 Flow Chamber and Fluidics System
2 laser lyskilde og bjelkeformingssystem
3 Optisk system
4 Elektronikk, lagrings-, skjerm- og analysesystem
5 cellesorteringssystem
Blant dem er lasereksitasjon i laserlyskilden og stråledannesystemet hovedmåling av fluorescenssignaler i flytcytometri. Intensiteten til eksitasjonslyset og eksponeringstiden er relatert til intensiteten til fluorescenssignalet. Laser er en sammenhengende lyskilde som kan gi enkeltbølgelengde, høyintensitet og høystabilitetsbelysning. Det er den ideelle eksitasjonslyskilden for å oppfylle disse kravene.
Det er to sylindriske linser mellom laserkilden og strømningskammeret. Disse linsene fokuserer en laserstråle med et sirkulært tverrsnitt som sendes ut fra laserkilden til en elliptisk bjelke med et mindre tverrsnitt (22 μm × 66 μm). Laserenergien i denne elliptiske strålen fordeles i henhold til en normalfordeling, noe som sikrer jevn lysintensitet for celler som passerer gjennom laserdeteksjonsområdet. På den annen side består det optiske systemet av flere sett med linser, pinholes og filtre, som grovt kan deles inn i to grupper: oppstrøms og nedstrøms for strømningskammeret.
Det optiske systemet foran flytkammeret består av et objektiv og pinhole. Hovedfunksjonen til linsen og pinhole (vanligvis to linser og et pinhole) er å fokusere laserstrålen med et sirkulært tverrsnitt som sendes ut av laserkilden i en elliptisk bjelke med et mindre tverrsnitt. Dette fordeler laserenergien i henhold til en normalfordeling, og sikrer jevn lysintensitet for celler over laserdeteksjonsområdet og minimerer interferens fra bortkommen lys.
Det er tre hovedtyper av filtre:
1: Langpassfilter (LPF) - tillater bare lys med bølgelengder høyere enn en spesifikk verdi å passere gjennom.
2: Short -Pass Filter (SPF) - tillater bare lys med bølgelengder under en spesifikk verdi å passere gjennom.
3: Bandpass -filter (BPF) - lar bare lys i et spesifikt bølgelengdeområde å passere gjennom.
Ulike kombinasjoner av filtre kan dirigere fluorescenssignaler ved forskjellige bølgelengder til individuelle fotomultiplikatorrør (PMTS). For eksempel er filtre for å oppdage grønn fluorescens (FITC) foran PMT LPF550 og BPF525. Filtrene som brukes til å oppdage oransjerød fluorescens (PE) foran PMT er LPF600 og BPF575. Filtrene for å oppdage rød fluorescens (Cy5) foran PMT er LPF650 og BPF675.
Flowcytometri brukes hovedsakelig til cellesortering. Med fremme av datateknologi, utvikling av immunologi og oppfinnelsen av monoklonal antistoffteknologi, blir dens anvendelser innen biologi, medisin, apotek og andre felt stadig mer utbredt. Disse applikasjonene inkluderer celledynamikkanalyse, celleapoptose, celletyping, tumordiagnose, medikamentffektivitetsanalyse, etc.
Post Time: SEP-21-2023
