(Flowcytometri, FCM) er en celleanalysator som måler fluorescensintensiteten til fargede cellemarkører. Det er en høyteknologisk teknologi utviklet basert på analyse og sortering av enkeltceller. Den kan raskt måle og klassifisere størrelse, indre struktur, DNA, RNA, proteiner, antigener og andre fysiske eller kjemiske egenskaper til celler, og kan være basert på samlingen av disse klassifiseringene.
Flowcytometer består hovedsakelig av følgende fem deler:
1 Strømningskammer og fluidikksystem
2 Laserlyskilde og stråleformingssystem
3 Optisk system
4 Elektronikk, lagring, display og analysesystem
5 Cellesorteringssystem
Blant dem er lasereksitasjon i laserlyskilden og stråledannende systemet hovedmålingen av fluorescenssignaler i flowcytometri. Intensiteten til eksitasjonslyset og eksponeringstiden er relatert til intensiteten til fluorescenssignalet. Laser er en sammenhengende lyskilde som kan gi enkeltbølgelengde, høy intensitet og høy stabilitetsbelysning. Det er den ideelle eksitasjonslyskilden for å oppfylle disse kravene.
Det er to sylindriske linser mellom laserkilden og strømningskammeret. Disse linsene fokuserer en laserstråle med et sirkulært tverrsnitt som sendes ut fra laserkilden til en elliptisk stråle med et mindre tverrsnitt (22 μm × 66 μm). Laserenergien i denne elliptiske strålen fordeles i henhold til en normalfordeling, noe som sikrer konsistent belysningsintensitet for celler som passerer gjennom laserdeteksjonsområdet. På den annen side består det optiske systemet av flere sett med linser, nålehull og filtre, som grovt sett kan deles inn i to grupper: oppstrøms og nedstrøms for strømningskammeret.
Det optiske systemet foran strømningskammeret består av en linse og nålhull. Hovedfunksjonen til linsen og nålhullet (vanligvis to linser og et nålhull) er å fokusere laserstrålen med et sirkulært tverrsnitt som sendes ut av laserkilden til en elliptisk stråle med et mindre tverrsnitt. Dette fordeler laserenergien i henhold til en normal fordeling, og sikrer konsistent belysningsintensitet for celler over laserdeteksjonsområdet og minimerer interferens fra strølys.
Det er tre hovedtyper av filtre:
1: Langpassfilter (LPF) - lar kun lys med bølgelengder høyere enn en spesifikk verdi slippe gjennom.
2: Kortpassfilter (SPF) - lar kun lys med bølgelengder under en bestemt verdi slippe gjennom.
3: Båndpassfilter (BPF) - lar kun lys i et spesifikt bølgelengdeområde passere gjennom.
Ulike kombinasjoner av filtre kan rette fluorescenssignaler ved forskjellige bølgelengder til individuelle fotomultiplikatorrør (PMT). For eksempel er filtre for å oppdage grønn fluorescens (FITC) foran PMT LPF550 og BPF525. Filtrene som brukes til å oppdage oransje-rød fluorescens (PE) foran PMT er LPF600 og BPF575. Filtrene for å oppdage rød fluorescens (CY5) foran PMT er LPF650 og BPF675.
Flowcytometri brukes hovedsakelig til cellesortering. Med utviklingen av datateknologi, utviklingen av immunologi og oppfinnelsen av monoklonal antistoffteknologi, blir dens anvendelser innen biologi, medisin, farmasi og andre felt stadig mer utbredt. Disse applikasjonene inkluderer celledynamikkanalyse, celleapoptose, celletyping, tumordiagnose, medikamenteffektivitetsanalyse, etc.
Innleggstid: 21. september 2023
